ODREĐIVANJE PRIBORA REZULTATA KRVI PREMA STANDARDNOJ SERIJI
Koncept Rh faktora je previše općenit (i zastario). Sustav rhesus antigena je raznolik. Suvremene metode istraživanja omogućuju vam pojedinačne testove za Rh D, C, C, E, E. Osim toga, potrebno je identificirati slučajeve sa slabim D-antigenom ili promjenjivim D-antigenom. Sve ove informacije su također iznimno važne u odabiru donatora ako je potrebno.
Napredak u radu. Određivanje Rhesus-povezane krvi provodi se standardnim univerzalnim antiresus serumom za sve krvne skupine. Jedna kap (0,05 ml) ispitivane krvi ili eritrocita se ubrizgava u epruvetu i dodaje se 1-2 kapi standardnog univerzalnog reagensa "anti-Rhesus" iste krvne grupe. Promijenite sadržaj protresanjem epruvete i stavite je u vodenu kupelj 5 minuta na 37 ° C, budući da imunološka reakcija s antigenom zahtijeva optimalnu temperaturu. U pravilu, aglutinacija se događa unutar 3-5 minuta. Nakon tog vremena, kako bi se isključila nespecifična agregacija eritrocita, u epruvetu se doda 2-3 ml izotonične otopine natrijevog klorida i miješa (ali trese!), Okrećući cijev 2-3 puta.
U nekim slučajevima nije moguće odrediti primateljevu Rh opremu, a zatim upotrijebiti individualni test za Rh kompatibilnost krvi davatelja i primatelja.
Na Petrijevu posudu nanesite 2 kapi pacijentovog seruma i malu kap transfuzije krvi, pomiješajte ih i stavite u vodenu kupelj (42-45 ° C) 10 minuta. Ako dođe do aglutinacije, krv davatelja nije kompatibilna s krvlju primatelja i ne može se transfuzirati.
Tumačenje rezultata. Epruvete se skeniraju na svjetlo golim okom. S pozitivnim rezultatom, aglutinacija se izražava u izgledu pahuljica iz ljepljenih eritrocita na pozadini prosvijetljene tekućine. Uz negativan rezultat, tekućina u epruveti ostaje ravnomjerno obojena, bez znakova aglutinacije crvenih krvnih stanica. Rezultat se uzima u obzir kao istinit nakon provjere kontrole, uzoraka, tj., S pozitivnim rezultatom sa standardnim Rh-negativnim crvenim krvnim stanicama, s jednom skupinom s testiranom krvlju.
ODREĐIVANJE PRIBORA KRVI UZ POMOĆ KOLEKCIJA
Polikloni se izrađuju od ascitne tekućine miševa - nosača anti-D i anti-C hibrida. Anti-D, Anti-C, Anti-C, cikloni su dizajnirani za određivanje rezusa krvi.
Tijek određivanja. Na tableti se primjenjuju pojedinačne pipete s anti-D, Anti-C, Anti-C, jednom velikom kapljicom (0,1 ml). Uz kapi protutijela nanosi se jedna mala kap krvi (0,01 ml). Krv se miješa s reagensom. Vizualno se odvija tijek reakcije s ciklonima uz lagano ljuljanje tablete tijekom tri minute. Aglutinacija eritrocita s ciklonima obično se javlja u prvih 3-5 sekundi, ali promatranje treba provesti 3 minute zbog kasnijeg pojavljivanja aglutinacije s eritrocitima koji sadrže slabe sorte Rh antigena. Kada se koristi ciklonski termostat nije potreban,
Tumačenje rezultata. Rezultat reakcije u svakoj kapi može biti pozitivan ili negativan. Pozitivan rezultat izražen je u aglutinaciji (lijepljenju) eritrocita. Aglutinati su vidljivi golim okom u obliku malih crvenih agregata koji se brzo spajaju u velike pahuljice. Uz negativnu reakciju, kapljica ostaje ravnomjerno obojena u crveno, u njoj se ne otkrivaju aglutinati.
Prisutnost aglutinacije s anti-D, Anti-C ili Anti-s ciklonima ukazuje na to da je krv Rh pozitivna, a odsustvo aglutinacije ukazuje na to da je krv Rh negativna.
Definicija Rh pripadnosti
Reakcija aglutinacije u ravnini uz pomoć anti-D super ciklona.
Stavite veliku kap (oko 0,1 ml) reagensa na ploču ili ploču. Uz (0,02-0,03 ml) ispitivanih crvenih krvnih stanica stavite malu kapljicu. Reagens temeljito promiješajte s eritrocitima pomoću staklene šipke.
Nakon 10-20 sekundi, lagano pomičite ploču. Unatoč činjenici da se javlja čista aglutinacija u prvih 30 s, rezultati reakcije se uzimaju u obzir 3 minute nakon miješanja.
U prisutnosti aglutinacije, testirana krv je označena kao Rh pozitivna, ako ne i kao Rh negativna.
Da bi se odredio Rhesus pribor ubrzanom metodom u ravnini pri sobnoj temperaturi mogu se koristiti poliklonalni anti-D serumi s nepotpunim antitijelima, pripremljeni u kombinaciji s koloidima (albumin, poliglucin).
Postupak konglutinacije s 10% želatine.
Korišteni su reagensi koji sadrže nekompletna poliklonska antitijela (anti-D serum) ili djelomična monoklonska antitijela (anti-D polikloni).
U 2 epruvete napravite 0,02-0,03 ml sedimenta eritrocita, pri čemu se iz pipete istisne mala kap eritrocita i njome se dodiruje dno epruvete. Zatim se u prvu epruvetu dodaju 2 kapi (0,1 ml) želatine i 2 kapi (0,1 ml) reagensa, u drugu (kontrolnu) epruvetu se dodaju 2 kapi (0,1 ml) želatine i 2 kapi (0,1 ml). fiziološka otopina.
Sadržaj epruveta miješa se mućkanjem, nakon čega se stavi u vodenu kupelj 15 minuta ili termostat 30 minuta na temperaturi od +46 - 48 ° C. Nakon isteka navedenog vremena u epruvete se doda 5 do 8 ml fiziološke otopine, a sadržaj se miješa okretanjem cijevi 1 do 2 puta.
Rezultat se uzima u obzir kod gledanja cijevi na svjetlo golim okom ili kroz povećalo. Aglutinacija eritrocita pokazuje da je uzorak krvi koji se testira Rh pozitivan, odsutnost aglutinacije ukazuje da je krv koja se testira Rh negativna. Aglutinacija crvenih krvnih stanica trebala bi biti odsutna u kontrolnoj epruveti.
Za određivanje Rh-pribora ubrzanom metodom u epruveti na sobnoj temperaturi može se koristiti univerzalni reagens, koji je anti-D serum s nepotpunim antitijelima, razrijeđen s 33% poliglucina.
Ubrzana metoda s univerzalnim reagensom.
U tronožac su postavljena dva reda epruveta prema broju ispitivanih uzoraka crvenih krvnih zrnaca u svakom redu i dvije epruvete za standardne Rh-pozitivne i Rh-negativne crvene krvne stanice. U sve epruvete prvog reda ubrizgavaju se 2 kapi (0,1 ml) standardnog univerzalnog antiresus sredstva, u drugom redu - 2 kapi izotonične otopine i 1 kap 33% otopine poliglucina. Svaka kap daje 1 kap testne krvi, a standardne Rh-pozitivne i rez-negativne crvene krvne stanice se dodaju u kontrolne epruvete. Promiješati tresenjem. U pravilu, reakcija se odvija u prvoj minuti. Nakon 3 minute dodajte izotoničnu otopinu i ponovno protresite. Tada procjenjujemo po prisutnosti ili odsutnosti aglutinacije. Ako postoji aglutinacija, krv je pozitivna na Rh. Ne - Rh negativan.
Sl. 11. Skup antirezus seruma u stalku
Definicija Rh pripadnosti
Serum primatelja se nanosi na ploču, kap krvi davatelja se stavlja 10 puta u nju. Rezultat se očitava nakon 5 minuta, u prisutnosti aglutinacije, doda se kap fiziološke otopine i promatranje se nastavi još 2 minute. S negativnim rezultatom, aglutinacija se ne događa i kapljica ostaje ravnomjerno crvena. To znači da u serumu primatelja ne postoje antitijela protiv eritrocita u krvi koje se daruju i da nema kontraindikacija za transfuziju ovog uzorka.
Test za pojedinačnu kompatibilnost davatelja i primatelja krvi pomoću Rh faktora Rho (d)
Ovaj test pruža mogućnost da se utvrdi prisutnost ili odsutnost antitijela sustava rezusa u krvi primatelja protiv crvenih krvnih stanica donora. Stavite 2 kapi seruma primatelja, 1 kap 33% poliglucina i 1 kap krvi donora u epruvetu. to je 10 puta manje od kapljice davatelja krvi. Sadržaj epruvete se miješa razmazivanjem duž zidova. Nakon 3 minute, u cijev se doda 3 ml fiziološke otopine natrijevog klorida i nakon miješanja dobije se rezultat. S pozitivnim rezultatom vidi se aglutinacija eritrocita, izražena u većini slučajeva nejasno. S negativnim rezultatom ne dolazi do aglutinacije i sadržaj ostaje ravnomjerno obojen u ružičastoj boji. Pozitivan rezultat pokazuje da serum primatelja sadrži antitijela koja uzrokuju aglutinaciju crvenih krvnih stanica donora. To znači da je krv nespojiva i ne može se transfundirati. Negativan rezultat - odsustvo aglutinacije pokazuje da nema kontraindikacije za transfuziju ovog uzorka. Postavljanje testa kompatibilnosti s Rh-om može u nekim slučajevima biti praćeno pojavom lažne reakcije - pseudoaglutinacije eritrocita donora u serumu primatelja. Razlikovanje između istinitog i pseudoaglutinacije moguće je samo kada se ispituje pod mikroskopom svježe pripremljenog razmaza. Rezultat se uzima u obzir pri mikroskopu s malim povećanjem s okulom. (X15). Istinska aglutinacija daje grudice aglutinata u obliku "bobica duda" ili "grozdova grozdova". Kada se lažno pozitivan rezultat na pozadini slobodnih eritrocita vidi u različitim duljinama lanca eritrocita, formiranih u stupcima novčića.
Treba imati na umu: test za kompatibilnost s Rh-om ne zamjenjuje uzorke grupne kompatibilnosti i ne može se ograničiti na njegovu provedbu. Praksa pokazuje da je u nekim slučajevima test kompatibilnosti s Rh-om negativan, dok grupna kompatibilnost daje jasno pozitivan rezultat, što ukazuje da su donacije krvi od tog donora neprihvatljive.
Određivanje rezusne krvi
U humanim eritrocitima postoji 5 glavnih antigena rhesus sustava (D, C, c, E, e), od kojih je najveći imunogeni antigen D - Rh (D). Prisutnost ili odsutnost ovog antigena određuje Rh-pripadnost krvi: osobe s D-antigenom pripadaju skupini Rh-pozitivnih (među ljudima bijele rase ima oko 85%); Osobe koje ga nemaju su Rh negativne (oko 15%).
Imunogenost drugih (manjih) antigena Rh sustava značajno je niža i smanjuje se u nizu: c> E> C> e. Određivanje manjih antigena rhesus sustava obično se provodi kada su potrebne višestruke transfuzije, u slučajevima kada se imunosna protutijela na antigene rhesus sustava nalaze u serumu primatelja, uključujući pojedinačnu selekciju krvi.
Antigen D ima slabe varijante koje su grupirane u Dweek (Du) skupinu, čija je učestalost u populaciji oko 1%. Ove crvene krvne stanice su slabo ili uopće nisu aglutinirane potpunim anti-Rh antitijelima u izravnoj aglutinacijskoj reakciji.
Donatori koji sadrže Du trebaju biti klasificirani kao Rh pozitivni, jer, prvo, transfuzija njihove krvi osjetljive na D-antigen pomoću Rh-negativnih primatelja može uzrokovati ozbiljne reakcije transfuzije, a drugo, može izazvati imunološki odgovor u Rh negativni primatelji. Stoga se krv darivatelja mora testirati na prisutnost Du i, ako se otkrije, smatrati Rh-pozitivnom.
Primatelji koji sadrže antigen Du trebaju biti klasificirani kao Rh-negativni i samo Rh-negativna krv treba transfundirati, jer normalni antigen D može izazvati imunološki odgovor kod takvih pojedinaca. Stoga se od krvi primatelja ne zahtijeva testiranje na prisutnost Du.
Rhesus pripadnost određuje se u reakciji aglutinacije pomoću monoklonskih reagensa ili izoimunskih anti-Rhesus seruma konstruiranih da detektiraju Rh (D) -antigen u izravnoj aglutinacijskoj reakciji (na ravnini iu epruveti; u slanoj podlozi; u prisutnosti pojačivača visoke molekularne težine; enzimima) ili u indirektnom antiglobulinskom testu (indirektni Coombsov test). Metoda određivanja ovisi o klasi protutijela u reagensu: ako su prisutna potpuna antitijela (klase IgM), reagens se koristi za određivanje Rh faktora izravnom aglutinacijom u mediju soli; ako sadrži nepotpuna antitijela (iz klase Ig G), tada se ona koristi u reakciji aglutinacije u prisutnosti pojačivača visoke molekularne težine (albumin, želatine, itd.), s eritrocitima tretiranim s proteolitičkim enzimima, u indirektnom antiglobulinskom testu.
Tehnika određivanja rezusne krvi
Reakcija aglutinacije ravnine s anti-D monoklonskim reagensima (potpuna antitijela)
Određivanje se provodi u prostoriji s dobrim osvjetljenjem. Test daje najbolje rezultate kada se koristi visoka koncentracija crvenih krvnih zrnaca i temperatura od oko 37 ° C, pa je preporučljivo koristiti zagrijanu ploču. Za studiju upotrijebite punu krv, oprane crvene krvne stanice, crvene krvne stanice u plazmi, serumu, konzervansu ili slanoj otopini.
Postupak se provodi u sljedećem redoslijedu:
1. Nanesite veliku kap (oko 0,1 ml) reagensa na ploču ili ploču.
2. U blizini se primjenjuje mala kap (oko 0,03 ml) ispitivane krvi (eritrociti).
3. Reagens temeljito promiješajte s krvlju čistom staklenom šipkom.
4. Nakon 10-20 sekundi ploča se lagano okrene. Usprkos činjenici da se javlja jasna aglutinacija u prvih 30 s, rezultati reakcije trebaju se uzeti u obzir 3 minute nakon miješanja.
5. Rezultati reakcije bilježe se odmah nakon završetka.
U prisutnosti aglutinacije, ispitivana krv je označena kao Rh pozitivna, ako nema aglutinacije - kao Rh-negativna. Ako je aglutinacija mnogo slabija od one opažene kod Rh (D) pozitivnih eritrocita, ispitivana krv pripada podgrupi slabih Rh-Du antigena. Kako bi se pojasnila povezanost takvog uzorka krvi s skupinom Du, studija se provodi s drugim reagensom koji sadrži IgG (nepotpune) anti-D antitijela (vidjeti odjeljak 6.2.2.3).
Reakcija aglutinacije pomoću nepotpunih anti-D antitijela (IgG) u prisutnosti aditiva visoke molekulske mase
Reakcija se provodi ili sa posebno pripremljenim reagensom koji već sadrži pojačivač (univerzalni reagens s poliglucinom ili albuminom za ravninu), ili se tijekom reakcije dodaje pojačivač (reakcija konglutinacije s želatinom u epruveti).
Tehnika podešavanja reakcije aglutinacije na ravnini ne razlikuje se od tehnike opisane u poglavlju 6.2.2.1. Međutim, univerzalni reagensi mogu dati lažno pozitivnu reakciju s Rh negativnim eritrocitima zbog visokomolekularnih tvari koje se u njima nalaze, a također može uzrokovati aglutinaciju eritrocita obloženih antitijelima drugih (ne antiresus) specifičnosti. Stoga je potrebno provesti paralelna ispitivanja s kontrolnom otopinom korištenog pojačala, ali bez anti-0 antitijela. Ako kontrolna otopina uzrokuje aglutinaciju crvenih krvnih stanica, rezultati ispitivanja nisu pouzdani i određivanje treba ponoviti s drugim reagensom koji sadrži cjelovita IgM protutijela (po mogućnosti s monoklonskim antitijelima).
Reakcije konglutinacije upotrebom želatine.
Za ovaj test mogu se upotrijebiti monoklonalni reagensi i standardni izoimunski serumski anti-rezus s nekompletnim antitijelima.
1. Dodajte 1 kap (oko 0,05 ml) ispitivane krvi ili suspenzije crvenih krvnih stanica (približno 50%) u serum u epruvetu.
2. Dodati 2 kapi (0,1 ml) 10% -tne otopine želatine, prethodno zagrijanu do ukapljivanja na +46. + 48 ° C.
3. Dodati 2 kapi (0,1 ml) anti-D reagensa i pomiješati.
4. Stavite epruvetu u vodenu kupelj s temperaturom od +46. + 48 ° C 5-10 min ili u suhom zraku na istoj temperaturi 30 min.
5. Dodajte 5 - 8 ml slane otopine u epruvetu i nježno okrenite epruvetu punjenu čepom 1-2 puta nježno.
6. Odredite prisutnost aglutinata promatranjem cijevi na svjetlo golim okom ili kroz povećalo.
7. Zapišite rezultate odmah.
Uzorak želatine zahtijeva provođenje sljedećih kontrola:
sa standardnim Rh-pozitivnim crvenim krvnim stanicama;
sa standardnim Rh negativnim eritrocitima;
s ispitivanim crvenim krvnim stanicama i otopinom želatine, ali bez anti-0-antitijela.
S pozitivnim rezultatom, aglutinati se razlikuju kao agregati različitih veličina na transparentnoj pozadini - krv je Rh pozitivna. Uz negativan rezultat, u epruveti nema agregata, vidljiva je jednolično obojena neprozirna suspenzija eritrocita - krv je Rh negativna. Ako postoji sitnozrna, sumnjiva aglutinacija, krv treba testirati indirektnim antiglobulinskim testom (vidi poglavlje 6.2.2.3). Rezultati testa želatine su pouzdani samo u slučaju kada sama želatina ne uzrokuje aglutinaciju ispitivanih crvenih krvnih stanica, a rezultati kontrola sa standardnim crvenim krvnim zrncima odgovaraju očekivanim. U slučaju neadekvatnih rezultata kontrole, definiciju Rh dodatne opreme treba ponoviti upotrebom drugog reagensa ili uzorka želatine. Ako sama želatina uzrokuje aglutinaciju ispitivanih crvenih krvnih zrnaca, može se pretpostaviti da imaju anti-eritrocitna antitijela antiresus ili drugu specifičnost (to je uočeno kod hemolitičke bolesti novorođenčeta, autoimune hemolitičke anemije i nekih zaraznih bolesti). U tom slučaju krv treba usmjeriti na studiju u poseban serološki laboratorij.
Indirektni antiglobulinski test s nekompletnim anti-0 antitijelima (IgG)
1. Pripremite 2-5% -tnu suspenziju ispitivanih eritrocita ispranih tri puta u fiziološkoj otopini. Da biste to učinili, stavite 5 kapi (oko 0,25 ml) test krvi u epruvetu, isperite tri puta u 5-10 ml fiziološke otopine; suspendirati sediment eritrocita u 2-3 ml fiziološke otopine ili, po mogućnosti, u 2-3 ml otopine LISS, u kojoj je fiksacija antitijela na eritrocite jača i javlja se brže nego u fiziološkoj otopini.
2. Dodajte 1 kap anti-0 reagensa u čistu epruvetu s oznakom.
3. Dodajte 1 kap 2–5% suspenzije crvenih krvnih stanica.
4. Inkubirajte smjesu na + 37 ° C 30–45 min (ako su eritrociti izvagani u fiziološkoj otopini) ili 10–15 min (ako su eritrociti izvagani u LISS-u).
5. Operite crvene krvne stanice 1 put (u slučaju uporabe monoklonskog reagensa) ili 3 puta (u slučaju korištenja izoimunskog anti-0 seruma) s velikim volumenom (5-10 ml) fiziološke otopine. Jedno pranje dopušteno je samo kada se koriste monoklonalni reagensi. Potpuno uklonite fiziološku otopinu.
6. Dodati 1 kap antiglobulinskog reagensa u precipitat i dobro promiješati.
7. Centrifugirajte 15-20 s na 2.000-3000 o / min.
8. Lagano resuspendirati sediment i vizualno detektirati prisutnost aglutinacije.
9. Odmah zabilježite rezultate određivanja.
U odsutnosti aglutinacije, krv je Rh-negativna. S pozitivnom reakcijom - Rh pozitivnom; Du podgrupe mogu uzrokovati slabu aglutinaciju čak iu ovom vrlo osjetljivom testu. Prije pripisivanja donora Du na Rh pozitivan, zaključak treba potvrditi kontrolnom studijom seruma antiglobulina sa standardnim crvenim krvnim stanicama. Ako je kontrolni test pozitivan, interpretacija nije pouzdana. U tom slučaju primatelj treba primati samo Rh-negativnu krv (eritrocite), a krv takvog donora ne smije se koristiti za transfuziju do konačnog određivanja Rh-pripadnosti.
Aglutinacija eritrocita liječenih proteolitičkim enzimima pomoću nepotpunih anti-0 antitijela (IgG)
Nekompletna antitijela mogu uzrokovati izravnu aglutinaciju u slanom mediju eritrocita tretiranih bromelinom, papainom, tripsinom i drugim proteazama. Ova metoda je vrlo osjetljiva i pouzdana u identificiranju slabih oblika D-antigena. Koristi se uglavnom u automatskom određivanju krvnih grupa u Gruppomatic sustavima, u kojima je osigurana standardizacija obrade crvenih krvnih zrnaca enzimima i posebno odabrano razrjeđivanje reagensa, budući da je za ovaj test karakterističan fenomen prozona (inhibicija aglutinacije s viškom antitijela).
U slučaju ručnog određivanja krvnih grupa, metoda se može koristiti u specijaliziranim serološkim laboratorijima.
Rhesus pripadnost
Rezus (Rh-faktor, Rh) je Rhesus antigen koji se nalazi na površini crvenih krvnih stanica.
Rhesus sustav sastoji se od pet glavnih antigena. Najjači (najviše imunogeni) je Rh (D) antigen, nazvan Rh faktor. Ako ljudski eritrocit sadrži taj protein, tada je njegova krv Rh pozitivna, označena je Rh + (javlja se kod 85% ljudi). Ako Rh (D) antigen nije prisutan u krvi, smatra se Rh-negativnim, što pokazuje Rh- (15% populacije svijeta).
Rh faktor i krvna grupa u sustavu AB0 su znakovi koji su konstantni za ljudsko tijelo tijekom života. Oni su neovisni jedni od drugih. Osoba može imati jednu od četiri krvne grupe i negativan ili pozitivan Rh faktor.
Rezus-konflikt je nekompatibilnost krvi u Rh faktoru, koja se može pojaviti kada kriva krv za transfuziju. Riječ je o nekompatibilnosti ako eritrociti donora sadrže Rh faktor (Rh-aglutinogen), a krv primatelja nije.
Kada Rh-pozitivna donorska krv uđe u tijelo Rh-negativnog primatelja, ona počinje proizvoditi antitijela protiv Rh faktora. Uništavaju crvene krvne stanice. Stoga, kod transfuzije eritrocita, plazme ili krvi, neophodno je razmotriti kompatibilnost krvi i kod Rh faktora i u krvnoj skupini.
Ako su antitijela na Rh faktor već prisutna u ljudskoj krvi, njihov je titar naveden u krvnim testovima i naziva se "anti-Rh (titar)".
Osim slučajeva transfuzije krvi, određivanje Rh faktora igra važnu ulogu u planiranju trudnoće iu razdoblju gestacije. Ako se kod majke i djeteta pojavi imunološki sukob, to može dovesti do razvoja hemolitičke bolesti novorođenčeta (HDN). Rhesus-konflikt razvija se u Rh-negativnoj trudnici, ako je njezin fetus Rh-pozitivan. Suprotni slučaj, kada je trudna Rh pozitivna, a fetus - Rh-negativan, ne predstavlja opasnost za razvoj hemolitičke bolesti novorođenčeta.
Hemolitička bolest novorođenčadi je hemolitička žutica novorođenčadi koja se razvija s nekompatibilnošću majke i fetusa s antigenima crvenih krvnih stanica. U 99% slučajeva bolest se javlja s nekompatibilnošću Rh faktora, mnogo rjeđe (1%) - u sustavu AB0 ili drugim Rhesus antigenima (C, E, C, d, e) ili M, N, Kell antigeni. U svakom slučaju, ako fetalni antigeni prodru u krv Rh-negativne majke, češće Rh (D), u njenom tijelu nastaju specifična antitijela. Oni prolaze kroz placentu u krv fetusa i uništavaju crvene krvne stanice koje sadrže antigen (Rh).
HDN se ne razvija kod svih trudnica, rizik se povećava kod ponovljenih trudnoća, s transfuzijama krvi bez uzimanja u obzir kompatibilnosti rezusa, čime se krši propusnost posteljice. Ako se na početku trudnoće pojavi imunološki sukob, to može dovesti do ponovljenih pobačaja ili prijevremenih poroda.
Indikacije za istraživanje
Određivanje kompatibilnosti krvi prije transfuzije.
Priprema za operaciju.
Promatranje žena tijekom trudnoće.
Priprema za studiju
Krv za istraživanje uzima se ujutro na prazan želudac, čak i čaj ili kava su isključeni. Dopušteno piti običnu vodu.
Noć prije ograničenja masne hrane, a ne pijenja alkohola, vježbanje je nepoželjno.
Vremenski interval od zadnjeg obroka do analize je najmanje osam sati.
Uklonite tjelesnu aktivnost 30 minuta prije prikupljanja krvi.
Materijal za učenje
Tumačenje rezultata
Rh (+) pozitivan - krv sadrži Rh faktor (Rh-aglutinogen),
Rh (-) negativno - krv ne sadrži Rh faktor (Rh-aglutinogen).
Odaberite svoje simptome zabrinutosti, odgovorite na pitanja. Saznajte koliko je vaš problem ozbiljan i trebate li posjetiti liječnika.
Prije korištenja informacija koje se nalaze na stranicama medportal.org, pročitajte uvjete korisničkog ugovora.
Korisnički ugovor
Stranica medportal.org pruža usluge pod uvjetima opisanim u ovom dokumentu. Početkom korištenja web-mjesta potvrđujete da ste pročitali uvjete ovog Korisničkog ugovora prije korištenja web-lokacije i prihvatili sve uvjete ovog Ugovora u cijelosti. Nemojte koristiti web-mjesto ako se ne slažete s tim uvjetima.
Opis usluge
Sve informacije objavljene na stranicama služe samo kao referenca, informacije preuzete iz otvorenih izvora su referentne i ne oglašavaju se. Stranica medportal.org pruža usluge koje omogućuju korisniku da traži lijekove iz podataka dobivenih iz ljekarni kao dio sporazuma između ljekarni i medportal.org. Radi lakšeg korištenja podataka o lijekovima, dodaci prehrani sistematizirani su i dovedeni do jednog pravopisa.
Stranica medportal.org pruža usluge koje omogućuju korisniku pretraživanje klinika i drugih medicinskih informacija.
ograničenje odgovornosti
Informacije u rezultatima pretraživanja nisu javna ponuda. Administracija stranice medportal.org ne jamči točnost, potpunost i (ili) relevantnost prikazanih podataka. Administracija web-mjesta medportal.org nije odgovorna za štetu ili štetu koju ste pretrpjeli zbog pristupa ili nemogućnosti pristupa web-lokaciji ili zbog korištenja ili nemogućnosti korištenja ove web-lokacije.
Prihvaćanjem uvjeta ovog ugovora u potpunosti razumijete i slažete se da:
Informacije na stranicama služe samo kao referenca.
Administracija stranice medportal.org ne jamči odsutnost pogrešaka i odstupanja u odnosu na prijavljenu na web-lokaciji i stvarnu dostupnost robe i cijene robe u ljekarni.
Korisnik se obvezuje telefonskim pozivom u ljekarnu razjasniti informacije koje su od interesa ili upotrijebiti informacije koje su na raspolaganju.
Administracija stranice medportal.org ne jamči odsutnost pogrešaka i odstupanja u rasporedu rada klinika, njihove kontakt podatke - telefonske brojeve i adrese.
Ni uprava medportal.org niti bilo koja druga strana uključena u proces pružanja informacija neće biti odgovorni za bilo kakvu štetu ili štetu koju ste možda pretrpjeli zbog toga što ste se u potpunosti oslonili na informacije sadržane na ovoj web-stranici.
Administracija web-mjesta medportal.org se obvezuje i obvezuje se na daljnje napore kako bi se smanjila odstupanja i pogreške u dostavljenim informacijama.
Administracija stranice medportal.org ne jamči odsustvo tehničkih kvarova, uključujući i rad softvera. Administracija web-mjesta medportal.org se obvezuje što je prije moguće kako bi učinila sve kako bi se uklonili svi propusti i pogreške u slučaju njihovog nastanka.
Korisnik je upozoren da administracija stranice medportal.org nije odgovorna za posjete i korištenje vanjskih resursa, linkovi na koje se mogu nalaziti na stranicama, ne daje odobrenje za njihov sadržaj i nije odgovoran za njihovu dostupnost.
Administracija stranice medportal.org zadržava pravo obustaviti rad stranice, djelomično ili u potpunosti izmijeniti njezin sadržaj, izvršiti izmjene korisničkog ugovora. Takve promjene se vrše samo prema odluci Uprave bez prethodne najave Korisnika.
Prihvaćate da ste pročitali uvjete ovog Korisničkog ugovora i prihvatili sve uvjete ovog Ugovora u cijelosti.
Informacije o oglašavanju na kojima položaj na web-lokaciji ima odgovarajući ugovor s oglašivačem označene su "kao oglašavanje".
Krvna skupina i rezus
Definicija antigena crvenih krvnih stanica - identifikacija krvne grupe i Rh faktora - izuzetno je važna za kliničku praksu. Krvna skupina osobe određena je prisutnošću antigena na površini eritrocita i individualni je znak. Površinski antigeni eritrocita eritrocita određuju fenotip eritrocita ili ljudske krvne skupine.
Trenutno je poznato više od 200 antigena eritrocita, tako da se krvna grupa može razlikovati ovisno o broju antiseruma koji se koriste za identifikaciju antigena na površini eritrocita. Identificirani antigeni eritrocita u populaciji u 1% slučajeva smatraju se rijetkim.
Glavni sustav za identificiranje krvnih grupa je ABO sustav, u kojem je krvna grupa karakterizirana prisutnošću antigena A, B, AB na površini eritrocita (O), tj. četiri vrste krvi. U nekim priručnicima pronađeno je dodatno označavanje krvnih skupina: O (I); A (II); U (III) i AB (IV).
Otkriće antigena eritrocita 1901. godine pokrenulo je istraživanje dopuštenosti miješanja eritrocita različitih skupina, tj. kompatibilnost transfuzija krvi. Protutijela (također nazvana aglutinini) koja su aktivna protiv stranih antigena cirkuliraju u krvi (serumu) svakog pojedinca. Interakcija antigena-antitijela dovodi do aglutinacije (sljepljivanja) i uništenja crvenih krvnih stanica. Protutijela protiv antigena B cirkuliraju u krvi pojedinaca s krvnom grupom A. Pojedinci s krvnom skupinom B imaju antitijela protiv antigena A. Ako su u serumu otkrivena antitijela A, anti-A i anti-B, u krvnoj skupini AB, niti u antitijelu A ni Nikakva antitijela B nisu detektirana u serumu.
Tako su pojedinci s krvnom skupinom AB univerzalni primatelji velike krvi.
Pojedinci s krvnom skupinom O, od kojih crvena krvna zrnca nemaju niti A niti B antigene na površini, univerzalni su donatori.
Antitijela na eritrocitne antigene A ili B genetski su određena, prema krvnoj skupini eritrocita, dok su antitijela na druge površinske antigene eritrocita dobivena. Pacijenti koji primaju transfuzije akumuliraju antitijela tijekom vremena, što može zakomplicirati odabir željene krvne skupine. Za te bolesnike važno je izvršiti tipizaciju krvne skupine s procjenom najvećeg mogućeg spektra serumskih antitijela.
Procjena kompatibilnosti krvne skupine
Za procjenu kompatibilnosti krvnih skupina i mogućnosti transfuzije potrebno je proučiti reakciju antitijela iz seruma donora i eritrocita primatelja, kao i iz eritrocita donora i antitijela iz seruma primatelja.
Uz kompatibilnost krvnih skupina, miješanje eritrocita i seruma ne dovodi do promjene u sastavu i boji reakcijskog pada.
Ako su skupine nekompatibilne, miješanje eritrocita donora i seruma pacijenta uzrokuje aglutinacijsku reakciju - stvaranje heterogenosti u padu u obliku zaglavljenih crvenih stanica koje dotiču reakcijsko polje.
Rh faktor (Rh) se naziva antigen D, koji se može nalaziti na površini crvenih krvnih stanica. Prisutnost ili odsutnost ovog antigena na površini eritrocita pojedinca određuje takvu karakteristiku krvne grupe kao Rh pozitivnu ili Rh negativnu (Rh + ili Rh–). Oko 85% populacije ljudi ima Rh-pozitivnu krvnu skupinu (Rh +).
Za razliku od antitijela na AB antigene, antitijela na antigen D nisu prisutna u krvi. Nakon kontakta krvi Rh-pozitivne skupine s Rh-negativnim pojavljuje se senzibilizacija i sinteza anti-rhesus antitijela. Takva se reakcija razvija, na primjer, tijekom trudnoće Rh– majka Rh + fetus. Oslobađanje fetalnih stanica tijekom porođaja u majčin krvotok aktivira sintezu anti-rezus antitijela. U slučaju prelaska placentarne barijere s antiresus antitijelima i fetusom koji ulazi u krv, razvija se hemolitička žutica novorođenčeta, zbog uništenja crvenih krvnih stanica.
Određivanje Rh faktora je potrebno za svakog pojedinca uz određivanje krvne skupine. Primijećeno je da je težina strukture antigena eritrocita različita kod zdravih ljudi, a još više kod imunokompromitiranih pacijenata, trudnica.
Trenutno se određivanje krvnih grupa, Rh faktora, proizvodnje anti-eritrocitnih antitijela provodi automatski standardiziranim metodama, koje omogućuju istovremenu tipizaciju krvnih grupa, određivanje proizvodnje antitijela i kompatibilnost mogućih transfuzija. Vizualni prikaz dobivene kartice za svakog pacijenta može se tražiti tijekom cijelog života pacijenta, a pohranjuje se u bazu podataka laboratorija.
Indikacije za studiju: Svako bolničko liječenje, trudnoća.
Uvjeti prikupljanja i skladištenja
Za ispitivanje se koristi venska krv uzeta ili bez EDTA. Uzimanje uzoraka krvi obavlja se na prazan želudac, ili ne manje od 8 sati nakon posljednjeg obroka. Uzorak krvi može se čuvati na temperaturi od 4–8 ° C ne više od 24 sata.
Rezultati istraživanja ABO krvne grupe:
- 0 (I) - prva skupina;
- A (II) - druga skupina;
- B (III) - treća skupina;
- AB (IV) - četvrta krvna grupa.
Kada se identificiraju podtipovi (slabe varijante) grupnih antigena, rezultat se dobiva s odgovarajućim komentarom, na primjer, „otkrivena je oslabljena varijanta A2, potreban je individualni odabir komponenti krvi“.
- Rh (+) pozitivan;
- Rh (-) je negativan.
Ako se identificiraju slabi i varijantni podtipovi antigena D, izdaje se komentar: "otkriven je slab antigen Rh, preporuča se da se transfuzija Rh-negativnih komponenti krvi provede ako je potrebno."
O MOGUĆIM KONTRAINDIKACIJAMA POTREBNO je konzultirati specijaliste
Copyright FBUN Središnji istraživački institut za epidemiologiju, Rospotrebnadzor, 1998-2019
Određivanje krvne grupe i rezus - pribora
Određivanje krvne grupe.
Određivanje krvne grupe pomoću sustava AB0 (standardni postupak).
1. Ispitivanje se provodi na dvije serije standardnih serumskih hemaglutinirajućih seruma (serum I - bezbojna oznaka, II - plava, III - crvena, IV - svijetlo žuta) na potpisanoj (ime pacijenta) porculanske ploče ili ploče.
2. Omjer volumena krvi i seruma trebao bi biti 1:10.
3. Istraživanje se može provesti pri temperaturi zraka od 15 do 25 ° C.
4. Ploča lagano vrti. Kako dolazi do aglutinacije, ali ne prije 3 minute, kapljicama se dodaje jedna kap izotonične otopine natrijevog klorida. Rezultat se čita za 5 minuta:
1) I krvna skupina - u jednoj kapi nema aglutinacije;
2) Skupina II - standardni serumi skupina I i III aglutinatnih crvenih krvnih stanica, a kod seruma II. Skupine ne dolazi do aglutinacije;
3) Skupina III - standardni serumi skupina I i II daju pozitivnu reakciju, a serum III skupine negativni;
4) Skupina IV - standardni serumi svih triju skupina uzrokuju aglutinaciju. Međutim, za konačni zaključak potrebno je provesti kontrolnu studiju o specifičnosti reakcije sa standardnom grupom IV hemaglutinirajuće seruma.
Određivanje krvne grupe ABO sustavom (ekspresna metoda).
1. Istraživanje se provodi s dva monoklonska seruma: anti-A (ružičasta) i anti-B (tirkizna).
2. Reakcija se provodi na porculanskoj ploči na normalnoj temperaturi.
3. Promatrajte kada se ljulja 3 minute.
Rezultat se čita kako slijedi:
1) nema aglutinacije s anti-A serumom, a uz anti-B postoji - test B (III);
2) u kapi s anti-A serumom došlo je do aglutinacije, s anti-B ne-testnom krvi A (II);
3) došlo je do aglutinacije s oba seruma - ispitivana krv AB (IV);
4) nije došlo do aglutinacije u obje kapi - krvi 0 (I);
Određivanje Rh faktora krvi.
1. Za studiju se koriste posebni serumi koji pripadaju istoj krvnoj skupini u sustavu AB0 kao i kod bolesnika koji sadrže antiresinantitis.
2. U Petrijevu posudu stavite jednu kap seruma antiresus u šest točaka (3 od jedne serije i 3 druge), au jednoj točki - jednu kap standardnog AB (IV) seruma, koji ne sadrži Rh antitijela (kontrola za nespecifičnu aglutinaciju).
3. U prve kapi svake serije seruma dodajte jednu kap suspenzije ispitivanih crvenih krvnih stanica, u drugoj kapi svake serije - jednu kap kontrolne Rh-pozitivne, u trećoj - jednu kap kontrolnih Rh-negativnih crvenih krvnih stanica.
4. U kontrolnoj kapi sa serumom AB (IV) dodajte jednu kap ispitivanih eritrocita.
5. Kapi se miješaju i Petrijeva posuda se stavi u vodenu kupelj na temperaturi od 46-480 ° C tijekom 10 minuta.
Rezultat se očitava nakon uklanjanja čaše iz vodene kupelji na bijeloj pozadini: uzorci eritrocita koji su dali aglutinaciju s antiresus serumom su Rh-pozitivni i nisu davali aglutinaciju - Rh negativnu. U kontrolnoj kapi s AB (IV) serumom ne smije biti aglutinacije.
Druga metoda (koristeći univerzalni antiresus reagens) - trenutno,
1. Na dnu epruvete stavite 1 kap testne krvi i 1 kap standardnog reagensa i protresite.
2. Stavite epruvetu na vodoravnu površinu i "kotrljajte" dlan najmanje 3 minute kako bi se sadržaj proširio duž zidova
3. Dodajte 2-3 ml slane otopine, zatvorite epruvetu plutom i nježno je preokrenite 2-3 puta.
Procjena rezultata: protiv svjetlosti, ako su vidljive velike pahuljice - došlo je do aglutinacije (Rh-pozitivna krv), ako postoji jednolična ružičasta tekućina bez pahuljica u epruveti - nema aglutinacije (Rh-negativna krv)
Zabilježite u povijesti slučaja rezultat istraživanja:
1. Određivanje krvne grupe provode dva neovisna liječnika (jedna studija - u odjelu, druga - u ordinaciji transfuzijske terapije)
2. Ako rezultat odgovara, to Uklapa se u naslovnu stranicu povijesti bolesti OBAVEZNE SVE RIJEČI (primjer: Rh-pozitivan, ALI NE Rh +), stavite Potpis liječnika i Datum studiranja.
Definicija rezus dodataka (rezus faktor)
Definicija Rh-pribora (Rh faktor, Rh-faktor) - pokazatelj za određivanje pripadnosti osobe Rh-faktoru (jedan od antigena na površini crvenih krvnih stanica). Glavne indikacije za određivanje: transfuzija krvi, priprema za operaciju, hemolitička bolest novorođenčeta, planiranje trudnoće za prevenciju Rh-sukoba. Određivanje Rh faktora obično se provodi zajedno s određivanjem krvne skupine.
Antigeni Rhesus sustava imaju proteinsku strukturu. Antigeni rhesus sustava su proteini eritrocitne membrane s molekularnom težinom od 30000-32000. Karakteristično obilježje antigena ovog sustava je izražen polimorfizam, koji uzrokuje prisutnost mnogih vrsta antigena. Veliki broj antigena i njihovih sustava otkriveni su u humanim eritrocitima - D, Du, C, C, E, e, Cw, M, N, S, Kell, Kidd, Duffy, Diego i drugi. Trenutno najveću kliničku važnost imaju pet antigena iz skupine rhesus Rh - D, C, c, E, e, kao i antigeni Kell sustava (antigeni - K, K, Ku, itd.). Antigen D je tzv. Rh faktor (Rh). To predstavlja najveći klinički značaj jer ima izražene imunogene osobine u usporedbi s drugim antigenima rezus skupine. Oko 86% stanovništva Ruske Federacije je Rh-pozitivno (Rh +), E. imaju taj antigen na crvenim krvnim stanicama. Preostalih 14% populacije su Rh-negativni (Rh-). Smatra se da su rezus-negativni donori čija krv ne sadrži nijedan od antigena D, C i E. Antigen D ima varijante, takozvane "slabe" varijante, koje sačinjavaju skupinu Du i pojavljuju se s učestalošću od 1%. Donatori koji sadrže Du trebaju biti klasificirani kao Rh pozitivni. To treba uzeti u obzir tijekom transfuzije krvi kako bi se izbjegla komplikacija transfuzije krvi. Otkriti takve antigene može biti, koristeći posebne metode.
U nekim slučajevima počinje stvaranje antitijela (aloimunska antitijela) na te antigene u ljudskom tijelu. Ovo stanje se češće vidi tijekom trudnoće i transfuzije krvi. Tijekom trudnoće Rh-negativna majka Rh-pozitivnog fetusa može razviti sukob rezusa, koji se sastoji u formiranju antitijela u majčinom tijelu na eritrocite fetusa, što pridonosi uništenju eritrocita fetusa. Takav sukob može dovesti do pobačaja ili hemolitičke anemije fetusa. Ako je fetus Rh-negativan kod Rh pozitivne majke, onda se Rh-konflikt ne razvija. Bilo koji od gore navedenih antigena kada se ubrizga u krv antigen-negativne majke (ne sadrži različite vrste antigena eritrocita) može uzrokovati pojavu autoantitijela i komplicirati tijek trudnoće. Imunogenost glavnih antigena rhesus sustava smanjuje se redom: C-E-C-e.
Rezus-konflikt tijekom transfuzije krvi može se razviti kada donorski eritrociti nose Rh-antigen, a primatelj je Rh-negativan. Nakon transfuzije takve krvi, u Rh-negativnom primatelju nastaju antitijela na Rh faktor. Kao rezultat toga dolazi do uništenja membrane eritrocita i njihove smrti.
Dodatak 7. Upute za određivanje Rh-krvi
instrukcija
po definiciji rhesus krvi
(odobreno naredbom Ministarstva zdravstva Ruske Federacije od 9. siječnja 1998. N 2)
Definicija pripadnosti rezusa je u ljudskim eritrocitima otkriti antigen D Rhesus sustava.
Rhesus antigeni nalaze se sa sljedećom frekvencijom:
Rezus antigeni imaju sposobnost da uzrokuju stvaranje izoimunskih antitijela.
Najaktivniji u tom pogledu je antigen D, koji se podrazumijeva pod pojmom Rh faktor. Zbog prisutnosti ili odsutnosti antigena D svi ljudi su podijeljeni na Rh pozitivne i Rh negativne.
Različite kombinacije Rh antigena u krvi pojedinaca čine 28 skupina Rhesus sustava (Tablica 1). Četrnaest od njih sadrži antigen D - oni su Rh pozitivni, a ostalih četrnaest ne sadrže antigen D (donji dio tablice) - oni se nazivaju Rh-negativni.
II. Opće napomene
1. Definicija Rh dodataka
Definiciju Rh dodatne opreme izrađuje specijalist s posebnom obukom.
Određivanje Rhesus pribora za primatelje vrši se standardnim anti-D serumom, što omogućuje njihovo razdvajanje na Rhesus - pozitivan (Rh +) i rhesus - negativan (rh-).
Za razliku od primatelja, određivanje Rh donacije krvi donora provodi se u dvije faze: prvo, krv donora je testirana sa standardnim serumskim anti-D, a zatim je krv donora, koja je dala negativnu reakciju s anti-D serumom, dodatno ispitana sa standardnim antiresus serumima koji sadrže anti-C antitijela. i anti-e. Anti-C i anti-E protutijela mogu biti u serumu u čistom obliku i u kombinaciji s anti-D protutijelima, na primjer: anti-D + C; anti-D + E ili anti-D + C + E.
U broju Rh-negativnih donora se pripisuju samo oni čija krv daje negativnu reakciju sa svim serumima, tj. Ne sadrži niti jedan od ova tri antigena Rh D, C, E.
Ponekad su te dodatne studije potrebne i kod drugih osoba - u bolesnika sa sumnjom na izosensitizaciju i kod trudnica.
Rezultat određivanja rezusne pripadnosti krvi darivatelja bilježi se u posebnim listovima ili dnevniku i na prednjem listu donatorskog dnevnika (kartice) s datumom i potpisom od strane osoba koje su donijele odluku.
Rezultat utvrđivanja rezusne krvi bolesnika i drugih osoba bilježi se u posebnom dnevniku i na obrascu s datumom i potpisuju osobe koje su izvršile određivanje. Ovaj oblik se lijepi u povijest bolesti, a osim toga, rezultat naveden na ovom obrascu zabilježen je od strane liječnika u gornjem desnom kutu osobne anamneze i zapečaćen potpisom koji označava datum.
2. Računovodstvo skupine serumskih antiresusa.
Antiresin serum se obično proizvodi u obliku "univerzalnog", tj. bez antitijela anti-A i anti-B skupine. Takvi serumi prikladni su za određivanje Rhesus-povezane krvi ljudi bilo kojeg tipa prema ABO sustavu.
Međutim, ako se serumski antires proizvodi u različitim skupinama prema ABO sustavu, onda u tim slučajevima, pri određivanju Rh afiniteta, treba uzeti u obzir serumsku specifičnost. Serumski antiresus O (I) skupine određen je Rh pripadnošću samo u eritrocitima O (I) skupine; serumski antiresus skupine A (II) - samo u eritrocitima skupina O (I) i A (II); serumski antiresus skupina B (III) - samo u eritrocitima skupina O (I) i B (III); U eritrocitima AB (IV) i bilo koje druge krvne skupine određeni su serumski antiresus AB (IV) skupine i posebno pripremljena "univerzalna" Rhesusova pripadnost.
3. Kontrolne studije
Za svaku studiju ili niz studija potrebno je provjeriti specifičnost za provjeru specifičnosti i aktivnosti antiresus seruma. Za kontrolu se koriste standardne Rh - pozitivne crvene krvne stanice skupine O (I) ili ista skupina kao i ispitivana krv i standardne Rh negativne crvene krvne stanice.
Za standardne eritrocite vidi "Upute za prikupljanje i obračunavanje krvi dobivene od donora u malim dozama za pripremu standardnih eritrocita."
4. Značajke standardnih antiresus seruma
Standardni serumi za određivanje Rhesus dodataka mogu sadržavati Rh antitijela različita po obliku - potpuna i nepotpuna (vidi "Upute za ispitivanje seruma na prisutnost Rh antitijela"). Svako od tih antitijela djeluje samo u specifičnim uvjetima, stoga metoda za određivanje rezus-pribora ovisi o tome koja su rhesus antitijela u standardnom serumu.
Način upotrebe svakog standardnog serumskog antiresusa naznačen je u priloženim uputama.
III. Različite metode određivanja dodataka za rezus
Način određivanja Rh-pribora ovisi o obliku antitijela u standardnom serumu i načinu njegove proizvodnje.
Prilikom izdavanja seruma antiresus daje se kratka popratna uputa koja opisuje metodu za koju je namijenjen ovaj niz seruma.
1. Određivanje rezus pribora reakcijom konglutinacije
upotrebom želatine u epruveti s grijanjem 46-48 ° C
a) Posebna oprema.
Standardni antires anti-D serum s nepotpunim antitijelima.
Standardne crvene krvne stanice Rh + i rh- za kontrolu.
Centrifuge ili druge epruvete s kapacitetom od 10 ml.
Vodena kupelj 46-48 ° C. Termostat za suhi zrak 46-48 ° C
10% -tna otopina želatine. (Želatin se može uskladištiti s konzervansom - natrijevim sulfacilom (albucid) - u količini od 100 mg albucida na 10 ml 10% otopine želatine).
Povećalo s 2-4 puta povećanjem.
b) prethodnu obradu test krvi i standardnih crvenih krvnih stanica. Krv za ispitivanje treba uzeti u količini od 5-8 ml u epruveti bez stabilizatora. Na epruveti upišite ime, inicijale i krvnu skupinu osobe od koje je krv uzeta.
Obično, nakon zgrušavanja krvi, na dnu cijevi ostaje mala količina slobodnih crvenih krvnih stanica, koja se treba koristiti za testiranje. Ako te crvene krvne stanice nisu dovoljne, trebate protresti svežanj kako biste odvojili više crvenih krvnih stanica.
Dopušteno je čuvati krv 2-3 dana na temperaturi od + 4-8 ° C.
Možete uzeti krv s izotoničnom otopinom natrijeva citrata ili nekog drugog stabilizatora (0,25 ml po 1 ml krvi). U tom slučaju, eritrociti se moraju oprati, te ga treba dodati u cijev do vrha s izotoničnom otopinom NaCl, čiji se sadržaj miješa i centrifugira. Isprane crvene krvne stanice korištene za istraživanje.
Neposredno prije testa, krv se može uzeti iz točke uboda prsta staklenom šipkom i odmah staviti u epruvetu sa serumom koji je prethodno primijenjen antirezus pomiješan s želatinom 1: 2.
c) Tehnika definiranja. U tronožac su postavljena dva reda epruveta prema broju ispitivanih uzoraka crvenih krvnih zrnaca u svakom redu i dvije epruvete za standardne Rh-pozitivne i Rh-negativne crvene krvne stanice. Za svake dvije cijevi upisuje se ime i inicijali osobe čija će se krv pregledati. Cijevi su numerirane. U iste označene epruvete (u dva reda) ubrizgajte 1 kap (0,05 ml) ispitivanih eritrocita, au kontrolne epruvete jednu kap (0,05 ml) standardnih Rh + i r-eritrocita.
U sve epruvete prvog reda dodati jednu kap (0,05 ml) antiresus seruma.
U sve epruvete (u dva reda) dodajte dvije kapi (0,1 ml) 10% -tne otopine želatine, prethodno zagrijane do ukapljivanja.
Drugi red je kontrola kojom se isključuje moguće nespecifično lijepljenje ispitivanih crvenih krvnih stanica (izravni test želatine).
Sadržaj epruveta se miješa tresenjem i stalak s epruvetama se stavi u vodenu kupelj na 46-48 ° C tijekom 15 minuta ili u termostatu na suhi zrak tijekom 25-30 minuta.
Prilikom uklanjanja epruveta s vodene kupke ili termostata, dodajte im 5-8 ml izotonične otopine NaCl i pomiješajte sadržaj obrnutim cijevima 1-2 puta.
d) Tumačenje rezultata. Epruvete promatrajte svjetlom golim okom ili lupom.
Rezultat se tumači prema prisutnosti ili odsutnosti aglutinacije crvenih krvnih stanica.
Ako su pozitivni, aglutinati se lako uočavaju kao crvene grudice u bistroj, gotovo bijeljenoj tekućini.
Kada je negativna posljedica u epruveti vidljiva ravnomjerno u svijetlo crvenoj boji, opalescentna tekućina.
JAMSTVO:
Slika u bazi podataka nije navedena
Slika 1. Rezultat reakcije određivanja Rh-pribora metodom pomoću želatine.
Uzorci eritrocita koji se aglutiniraju s anti-D serumom su Rh-pozitivni (Rh +). Uzorci crvenih krvnih stanica koje se nisu aglutinirali s anti-D-rhesus negativnim (rh-) serumom. Međutim, rezultati se smatraju istinitim nakon provjere kontrolnih uzoraka koji potvrđuju specifičnost i aktivnost seruma antiresus, tj. u odsutnosti aglutinacije sa standardnim Rh-negativnim eritrocitima istog naziva i prisutnosti aglutinacije sa standardnim Rh-pozitivnim eritrocitima istog imena ili skupine O (I). U epruvetama druge (kontrolne) serije ne smije biti aglutinacije.
Prisutnost aglutinacije u bilo kojoj epruveti kontrolne serije (pozitivni test želatine je pozitivan) ukazuje na nespecifičnost reakcije. Pod tim uvjetima, pozitivan rezultat sa serumskim antiresusom ne može se smatrati istinitim. U takvim je slučajevima preporučljivo oprati ispitane crvene krvne stanice toplom izotoničnom otopinom NaCl za ispiranje autoantitijela iz njih i ponoviti studiju. Ako je rezultat upitan, treba primijeniti metodu aglutinacije u fiziološkoj otopini pomoću antiresus seruma koji sadrži potpuna antitijela kako bi se odredio Rh-pribor.
2. Određivanje rezus dodataka korištenjem standarda
univerzalni reagens (u cijevima bez grijanja)
standardni univerzalni antiresus reagens - anti-D;
33% otopina poliglucina;
standardne crvene krvne stanice Rh + i rh- za kontrolu;
centrifuge ili druge epruvete s kapacitetom od 10 ml;
povećalo s 2-4 puta povećanja.
Nije potrebna predobrada ispitne krvi. Krv se može upotrijebiti, uzeti neposredno prije studije s mjesta uboda prsta, krvi u limenkama i sedimenta eritrocita u epruveti, nakon formiranja konvulzije krvi uzete bez stabilizatora.
Dopušteno je čuvati krv 2-3 dana na 4-8 ° C.
U tronožac se ugrađuju dva reda epruveta prema broju ispitivanih uzoraka eritrocita u svakom redu i dvije epruvete za standardne Rh-pozitivne i Rh negativne eritrocite. Na epruvetama su upisana imena i inicijali osobe čija se krv istražuje.
U sve epruvete prvog reda injektiraju se 2 kapi (0,1 ml) standardnog univerzalnog antiresus reagensa.
U sve epruvete drugog (kontrolnog) reda injektiraju se 2 kapi (0,1 ml) izotonične otopine NaCl i 1 kap (0,05 ml) 33% otopine poliglucina.
Svaki par identično označenih epruveta se ubrizgava u skladu s oznakom s 1 kapljicom (0,05 ml) ispitne krvi. U epruvete namijenjene kontroli injektiraju se standardne Rh-pozitivne i Rh-negativne crvene krvne stanice.
Sadržaj epruveta se miješa tresenjem i zatim polako okreće uzduž osi, nagibajući gotovo do vodoravnog položaja tako da se sadržaj širi duž njegovih zidova. Takav protok krvi na zidovima cijevi čini reakciju izrazitijom. U pravilu, aglutinacija se javlja unutar prve minute, ali za stvaranje stabilnog kompleksa antigen-antitijelo i dobro izražena reakcija, kao i mogućnost odgođene reakcije sa slabo izraženom agrlutinacijom eritrocita, eritrociti se dodiruju s reagensom najmanje 3 min.
Nakon 3 minute u epruvete dodajte 2-3 ml izotonične 0,85% -tne otopine NaCl i sadržaj miješajte s 2-3-strukom inverzijom cijevi, bez potresanja.
Epruvete promatrajte svjetlom golim okom ili lupom. Rezultat se tumači prema prisutnosti ili odsutnosti aglutinacije crvenih krvnih stanica.
U prisutnosti aglutinacije u obliku velikih nakupina ili pahuljica ljepljenih eritrocita na pozadini prosvijetljenog fluida, krv koja se ispituje smatra se Rh-pozitivnom (Rh +). U odsutnosti aglutinacije (homogeno bojenje je zadržano u epruveti), krv koja se testira treba smatrati Rh-negativnom (rh-). Međutim, te rezultate treba smatrati istinitim samo nakon provjere kontrolnih uzoraka, tj. s pozitivnom reakcijom sa standardnim Rh-pozitivnim eritrocitima, negativnim - s Rh-negativnim, kao i nakon pregleda rezultata u 2. redu za kontrolu.
U svim epruvetama druge kontrolne serije ne bi trebalo biti aglutinacije.
JAMSTVO:
Slika u bazi podataka nije navedena
Slika 2. Rezultat određivanja Rh-pribora s reagensom.
Prisutnost aglutinacije u bilo kojoj epruveti kontrolne serije ukazuje na nespecifično lijepljenje crvenih krvnih stanica i stoga ne dopušta da se rezultati studije smatraju istinitim.
U ovom se slučaju preporučuje ispiranje ispitivanih eritrocita toplom izotoničnom otopinom NaCl za ispiranje autoantitijela iz njih i ponoviti studiju.
U sumnjivim slučajevima treba primijeniti metodu aglutinacije u slanoj podlozi pomoću seruma s potpunim antitijelima kako bi se odredio Rh-pribor.
3. Određivanje rezus pribora reakcijom konglutinacije u
medij sirutke na zagrijanoj ravnini
standardni antires anti-D serum s nekompletnim antitijelima;
standardne crvene krvne stanice Rh + i rh- za kontrolu;
vodena kupelj 46-48 ° C.
Prethodna obrada ispitivane krvi i standardnih crvenih krvnih stanica.
Krv za istraživanje uzeti u količini od 3-5 ml u običnim cijevima bez stabilizatora. Na epruveti je upisano ime, inicijali i krvna grupa osobe od koje se uzima krv. Obično, nakon zgrušavanja krvi, mala količina crvenih krvnih stanica ostaje na dnu cijevi, koja se treba koristiti za reakciju. Ako te crvene krvne stanice nisu dovoljne, trebali biste intenzivno protresti svežanj kako biste odvojili više crvenih krvnih stanica.
Eritrociti se koriste za istraživanje u obliku 5-10% suspenzije u vlastitom serumu. Suspenzija se priprema u oku u istim epruvetama protresanjem sadržaja.
Dopušteno je čuvati krv 2-3 dana na 4-8 ° C.
Jedna velika kap (0,1 ml) antirezus seruma u tri reda vodoravno se nanosi na plastičnu ploču na oznaci, sve u 6 točaka (3 - jedna serija seruma i 3 - druga). Osim toga, u jednoj se točki primjenjuje velika kap (0,1 ml) standardnog seruma AB (IV) skupine koja ne sadrži Rh antitijela (kontrola za nespecifičnu aglutinaciju).
U prvu kapljicu serumskih seruma dodajte jednu kap (0,05 ml) suspenzije suspendiranih crvenih krvnih stanica u drugu kap svake serije - 1 kap (0,05 ml) kontrolnih Rh pozitivnih stanica istog naziva s bolesnikovom krvnom grupom ili skupinom O (I), i trećoj kapi svake serije - 1 kap (0.05 ml) kontrolnih Rh negativnih crvenih krvnih stanica, nužno isto s krvnom grupom pacijenta u ABO sustavu. U kontrolnoj kapi u serumu AB (IV) skupine, koja ne sadrži Rh antitijela, dodajte 1 kap (0,05 ml) ispitivanih eritrocita. Kapi se miješaju sa staklenom šipkom i ploča se uroni u vodenu kupelj na 46-48 ° C 10 minuta.
Rezultati istraživanja su promatrani s laganom ljuljačkom i interpretirani prisutnošću ili odsutnošću aglutinacije crvenih krvnih stanica.
Ako su pozitivni, aglutinati se lako razlikuju na gotovo tekućoj pozadini tekućine.
Uz negativan rezultat, kapljica ostaje ravnomjerno crvena.
Uzorci eritrocita koji se aglutiniraju s anti-D serumom su Rh-pozitivni (Rh +).
Uzorci crvenih krvnih zrnaca koji nisu aglutinirali s anti-D serumom su Rh-negativni (rh-). Međutim, ti se rezultati smatraju istinitima samo ako se podudaraju u seriji antiresus seruma i nakon provjere kontrolnih uzoraka eritrocita koji potvrđuju specifičnost i aktivnost seruma antiresus, tj. u odsustvu aglutinacije sa standardnim Rh negativnim eritrocitima skupine istog naziva i prisutnosti aglutinacije sa standardnim Rh pozitivnim eritrocitima skupine istog imena ili skupine O (I), kao i negativnim rezultatom u kontrolnoj kapi u serumu skupine AB (IV) koji ne sadrži rhesus antitijela, Prisutnost aglutinacije u ovoj kapljici ukazuje na nespecifično lijepljenje crvenih krvnih stanica i stoga se pozitivan rezultat s serumskim anti-rezusom ne može smatrati istinitim. U tim slučajevima, Rh pripadnost treba odrediti drugim metodama istraživanja.
4. Određivanje rhesus pribora reakcijom
aglutinacija u slanoj otopini
standardni antires anti-D serum s potpunim antitijelima;
standardne crvene krvne stanice Rh + i rh- za kontrolu;
epruvete visine 1,5-2,0 cm i promjera 0,5-0,6 cm s glatkim okruglim dnom ili pločama za imunološke reakcije s udubljenjima iste konfiguracije i volumena;
povećalo s 2-4 puta povećanja;
Prethodna obrada ispitivane krvi i standardnih crvenih krvnih stanica.
Krv za ispitivanje uzeta u količini od 0,5-1 ml u konvencionalnim epruvetama koje sadrže 0,25 ml (5 kapi) izotoničnog natrij citrata ili drugog stabilizatora. Na epruveti je upisano ime, inicijali i krvna grupa osobe od koje je uzeta krv. Crvene krvne stanice moraju se isprati, za koje se u vrh epruvete doda izotonična otopina NaCl, sadržaj se miješa i centrifugira.
Možete uzeti krv bez stabilizatora. Štoviše, nakon zgrušavanja krvi, određeni broj slobodnih crvenih krvnih stanica obično ostaje u cijevi. Ako te crvene krvne stanice nisu dovoljne, snop treba snažno protresti kako bi se odvojilo više crvenih krvnih stanica. Tako dobivene crvene krvne stanice se ispiru kao što je gore opisano.
Iz ispranih eritrocita priprema se 2% -tna suspenzija, za koju se 1 kap eritrocita prenosi u odgovarajuće označenu epruvetu koja sadrži 49 kapi izotonične otopine NaCl.
Za istraživanje se koristi 2% suspenzije eritrocita.
Dopušteno je čuvati krv 2-3 dana na 4-8 ° C.
Dva reda epruveta se ugrađuju u tronožac u skladu s brojem uzoraka eritrocita koji su ispitani u svakom retku i dva za kontrole. Poklopac stativa stavite listom papira. Na njemu su rupe kroz koje su postavljene epruvete lagano probušene. Na svaki par epruveta na papiru se upisuju ime i inicijali osobe čija će se krv pregledati.
U svim epruvetama (jažicama) prvog reda, 1 kap (0,05 ml) antirezus seruma jedne serije ubrizgava se u sve epruvete (jažice) drugog reda - 1 kap (0,05 ml) antiresus seruma druge serije i u svim epruvetama (jažice) oba reda s 1 kapljom izotonične otopine NaCl.
U odgovarajuće označene parove epruveta (udubljenja) dodajte jednu kap (0,05 ml) 2% suspenzije ispitivanih eritrocita, au kontrolu jednu kap (0,05 ml) 2% suspenzije kontrolne (standardne) Rh-pozitivne i Rh - negativne crvene krvne stanice.
Sadržaj se temeljito promiješa tresenjem i stavi u termostat na 37 ° C 1 sat. Zatim možete ostaviti epruvete na stolu na sobnoj temperaturi još 1,5-2 sata prije snimanja rezultata.
Za to vrijeme eritrociti se spuštaju na dno, prije nego što dođu u kontakt sa serumskim antiresusom.
Epruvete (tablete) treba promatrati duž uzdužne osi iznad izvora svjetlosti prekrivenog matiranim staklom.
Rezultat se tumači prisutnošću ili odsutnošću aglutinacije eritrocita, što rezultira drugačijim oblikom njihovog sedimenta na dnu.
Uz pozitivan rezultat sediment eritrocita nalazi se na dnu neravnog sloja. Vidljiva hrapavost, spužvastost ili zrnatost strukture. Rubovi sedimenta nikada nisu ravnomjerni, zakrivljeni su, ponekad omotani unutra. U nekim slučajevima, crvene krvne stanice raspoređene su u obliku valovite vijenice oko svjetlijeg središnjeg dijela.
Uz negativan rezultat sediment eritrocita je ujednačen sloj bez grubosti i nepravilnosti, ponekad s malim prosvjetljenjem u sredini. Njezine granice su pravilno definirani krug.
Promjer sedimenta s negativnim rezultatom uvijek je manji nego kod pozitivnog.
Uzorci eritrocita koji su dali aglutinaciju s anti-D serumom su Rh-pozitivni (Rh +), uzorci eritrocita koji nisu aglutinirali s anti-D serum-Rh negativnim (rh-).
JAMSTVO:
Slika u bazi podataka nije navedena
Slika 4. Određivanje Rh dodataka u slanoj okolini.
Slika 5. Sediment eritrocita pri određivanju Rh pripadnosti u slanoj okolini.
Međutim, rezultati se uzimaju u obzir kao istiniti ako se podudaraju u oba serumska serija antiresusa i nakon provjere kontrolnih uzoraka koji potvrđuju specifičnost i aktivnost antiresus seruma, tj. u odsutnosti aglutinacije sa standardnim Rh-negativnim eritrocitima istog naziva i prisutnosti aglutinacije sa standardnim Rh-pozitivnim eritrocitima istog imena ili skupine O (I).
Ponovna upotreba seruma. Nakon određivanja Rh-pribora iz svih epruveta, serum se pažljivo isisava (crvene krvne stanice ostaju na dnu) i skupljaju se u epruveti. Ovaj se serum može ponovno koristiti nekoliko puta kako bi se odredio Rh-pripadnost, dok se njegova aktivnost ne iscrpi, tj. dok će dati jasnu aglutinaciju sa standardnim Rh-pozitivnim eritrocitima i negativnu reakciju sa standardnim Rh negativnim eritrocitima.
IV. Opće napomene
1. Prilikom određivanja Rh-pribora, bez obzira na metodu određivanja, rezultat se uzima u obzir kao istinit nakon provjere kontrolnih uzoraka koji potvrđuju specifičnost i aktivnost svakog serumskog antiresus niza, tj. u odsustvu aglutinacije sa standardnim Rh - negativnim eritrocitima iste skupine i prisutnošću aglutinacije sa standardnim Rh - pozitivnim eritrocitima iste grupe ili grupe O (I) i drugim kontrolnim uzorcima koji se koriste za svaku metodu.
2. Ako se uočava slaba ili sumnjiva reakcija u određivanju Rh-pribora, krv ove osobe treba ponovno ispitati s drugim serumskim antiresus serijama i drugim metodama, uključujući metodu aglutinacije u fiziološkoj otopini s serumima koji sadrže potpuna protutijela.
V. Ispitivanje drugih rhesus antigena
Kao kontrole se koriste eritrociti koji sadrže ili ne sadrže odgovarajući antigen.
"Upute za određivanje rezusne vrste krvi", koje je odobrilo Ministarstvo zdravlja SSSR-a 7. rujna 1990. godine N 05-14 / 29, smatrat će se nevažećim od odobrenja ove upute.